结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验的质量控制与质量保证

doi:10.3969/j.issn.1000-6621.2014.05.016

中国防痨杂志 ›› 2014, Vol. 36 ›› Issue (5): 380-384.doi: 10.3969/j.issn.1000-6621.2014.05.016

结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验的质量控制与质量保证

蒋俊

110044 沈阳市胸科医院检验科结核病实验室沈阳市结核病重点实验室

收稿日期:2013-04-21 出版日期:2014-05-10 发布日期:2014-06-07
通信作者: 蒋俊 E-mail:xkyyjykjj@sina.com

Quality control and quality assurance of T-SPOT.TB

JIANG Jun

TB Laboratory of Shenyang Chest Hospital，Shenyang TB Key Laboratory，Shenyang 110044，China

Received:2013-04-21 Online:2014-05-10 Published:2014-06-07
Contact: JIANG Jun E-mail:xkyyjykjj@sina.com

摘要/Abstract

摘要： 近几年来，结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在国内外已较多地应用于结核分枝杆菌感染检测或相关性研究。T-SPOT.TB作为集细胞生物学和免疫学检测技术为一体的新方法，虽然操作并不复杂，但对试验条件、操作技术和质量控制要求很高，其试验体系中外周血单个核细胞（PBMCs）的分离、加入活体细胞的数量、细胞孵育条件和结果判定等的全程质量控制，既是决定试验成败的关键，又是常常易于忽略的“潜在性”问题。作者依据其试验原理和临床实践对试验中常见的PBMCs分离呈现的不同状态进行了分析和描述；对PBMCs的分离、悬液制备、体外孵育和结果判定的质量控制进行了重点论述，其中就人工PBMCs计数误差对试验结果的影响进行了详细阐述。除此，还依据传统的改良牛鲍血细胞计数板白细胞计数法和溶液浓度稀释法溶液浓度与体积成反比的基本原理，结合活体PBMCs计数和标准细胞悬液终浓度2.5×10⁵/100μl的特殊要求，建立了简易的细胞计数“一步法”和“计算式”，使标准细胞悬液的制备趋于简化。

关键词: 结核/诊断, &, gamma, 干扰素释放试验, 白细胞, 单核, 细胞计数, 质量控制

Abstract: T-SPOT.TB has been widely used to assay the Mycobacterium tuberculosis infection all around the world. As a new cell biological and immunological detection technology which its operation isn’t complex, T-SPOT.TB also raises a claim strictly on experimental condition, operation technique and quality control. The overall quality control including PBMCs separation, adjusting the number of PBMCs, cell incubation condition and result determination is the key steps to succeed as well as to be ignored. According to the test principle and clinical practice, we described and analyzed the different states of PBMCs separation including PBMCs separation, suspension preparation, incubation and result determination, especially, the error of PBMCs count affected experimental result. In addition, we established “one-step” and “calculation formula” method for PBMCs count according to traditional improved NiuBao leukocyte count plate and solution concentration dilution method, PBMCs count and standard cell suspension final concentration of 2.5×10⁵/100μl.

Key words: Tuberculosis/diagnosis, Interferon-gamma release tests, Leukocytes, mononuclear, Cell count, Quality control

蒋俊. 结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验的质量控制与质量保证[J]. 中国防痨杂志, 2014, 36(5): 380-384. doi: 10.3969/j.issn.1000-6621.2014.05.016

JIANG Jun. Quality control and quality assurance of T-SPOT.TB[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2014, 36(5): 380-384. doi: 10.3969/j.issn.1000-6621.2014.05.016

参考文献

［1］World Health Organization. Global tuberculosis control 2008: surveillance, planning, financing. Geneva： World Health Organization, 2008.
［2］Lalvani A, Pathan AA, McShane H, et al. Rapid detection of Mycobacterium tuberculosis infection by enumeration of antigen-specific T cells.Am J Respir Crit Care Med， 2001，163(4):824-828.
［3］Chapman AL, Munkanta M, Wilkinson KA, et al.Rapid detection of active and latent tuberculosis infection in HIV-positive individuals by enumeration of Mycobacterium tuberculosis-specific T cells.AIDS， 2002,16(17):2285-2293.
［4］霍菲菲，张丽帆，刘晓清.评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在肺外结核病诊断中的敏感性.中国医学科学院学报，2009,31（4）：449-452.
［5］乐军，梁莉，李苏辉,等.酶联免疫斑点试验快速诊断结核分枝杆菌感染的临床应用价值.中华检验医学杂志，2006,29（11）：1005-1008.
［6］曾谊，冯枭，宋梅梅,等.酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核诊断中的价值.中国防痨杂志, 2012，34（2）: 100-102.
［7］丛玉隆，冯仁丰，陈晓东.临床实验室管理学.北京：中国医药科技出版社，2004：45-49.
［8］Meier T, Eulenbruch HP, Wrighton-Smith P, et al.Sensitivity of a new commercial enzyme-linked immunospot assay (T-SPOT.TB) for diagnosis of tuberculosis in clinical practice. Eur J Clin Microbiol Infect Dis， 2005，24(8):529-536.
［9］Piana F, Codecasa LR, Cavallerio P, et al. Use of a T-cell-based test for detection of tuberculosis infection among immunocompromised patients. Eur Respir J，2006，28(1):31-34.
［10］上海复星长征医学科技有限公司.结核感染T细胞检测（免疫斑点法）试剂盒说明书.上海：上海复星长征医学科技有限公司，2010.
［11］冯仁丰.实用医学检验学.上海：上海科学技术出版社，1996：79-80.
［12］朱忠勇，陈之航.临床医学检验学.上海：上海科学技术出版社，1978：263-270.

[1]	夏辉, 赵雁林. 世界卫生组织《结核病实验室加强实用手册(2022更新)》解读及对加强我国结核病实验室网络建设的启示[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(5): 458-463.
[2]	郑扬, 夏辉, 欧喜超, 宋媛媛, 赵雁林. 强化实验室认证管理项目对结核病实验室质量管理的效果评价[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(10): 967-973.
[3]	刘盛盛, 杨娟, 查兆煜, 张超, 许子炜, 唐神结, 林文红. HIV阴性肺结核患者外周血CD4⁺T淋巴细胞减少的免疫干预意义及影响因素分析[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(6): 587-594.
[4]	张黎娟, 张华, 王霞芳, 施美华, 冯彦军, 张建平, 唐佩军. 结核特异性抗原与CD4⁺ T细胞计数比值对AIDS合并肺结核的辅助诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(3): 284-288.
[5]	苏伟, 李仁忠, 阮云洲, 姜佳雯, 王萌, 谢添, 王忠生, 许晚光, 方冠臣, 曾燕, 汤文芳. 痰标本留取质量干预对初诊肺结核患者病原学阳性检出率的影响[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(12): 1269-1274.
[6]	张凯, 沈小兵, 陶立峰, 韦芬, 陈保文, 仇晶晶, 陈伟, 卢锦标, 朱银猛, 程兴, 钟再新, 赵爱华, 蒲江. 重组结核杆菌融合蛋白(EC)产品质量标准的建立[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(8): 814-820.
[7]	黄芳,王勃,赵国连,王海东,党丽云. T淋巴细胞检测对非结核分枝杆菌病的诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2019, 41(12): 1263-1268.
[8]	姚利,盛健,王冰,戴希勇. 外周血结核感染T细胞斑点试验对脊柱结核诊断价值的Meta分析[J]. 中国防痨杂志, 2019, 41(10): 1084-1089.
[9]	何畏,陈晴,黄涛,黄晓秋,吴桂辉. 肺结核及肺外结核患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义[J]. 中国防痨杂志, 2019, 41(10): 1090-1095.
[10]	李晶晶,闫铄,薛明,魏连贵,吕志彬,谢汝明. 获得性免疫缺陷综合征并发颅内结核的MRI特征及与CD4 ⁺T淋巴细胞计数的关系[J]. 中国防痨杂志, 2018, 40(7): 689-695.
[11]	黄迪希，谭守勇，刘志辉. 蛋白质组学在结核性胸腔积液诊断中的现状及进展[J]. 中国防痨杂志, 2016, 38(3): 180-184.
[12]	吴妍，李琦，张宗德. γ-干扰素释放试验对老年肺结核的辅助诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2016, 38(2): 122-128.
[13]	方勇，肖和平. 潜伏性结核感染的诊治进展[J]. 中国防痨杂志, 2016, 38(2): 144-147.
[14]	陈兴年，刘奇栋，王泓，叶志坚，吴妹英. 活动性肺结核患者血清中白细胞介素6、8和肿瘤坏死因子α检测的临床意义[J]. 中国防痨杂志, 2015, 37(4): 344-347.
[15]	万荣，李明武，赖明红，刘永莉. 结核感染T细胞斑点试验在老年肺结核中的诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2015, 37(4): 348-352.

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